Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是MTT，XTT等的替代方法，一种基于WST-8（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分。WST-8在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的Formazan。对于同样的细胞，颜色的深浅(生成的Formazan量)和细胞数目呈线性关系。可用于药物筛选、细胞增殖和毒性测定、肿瘤药敏等试验。

操作步骤

- 制作标准曲线（测定细胞具体数量）

先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞；

按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做4-7个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔；

接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加入CCK-8试剂（按每100 μL培养基加10μL CCK-8）培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标，OD值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。（使用此标准曲线的前提条件是试验条件完全一致）

- 细胞活性检测

在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)，将培养板放在培养箱中预培养一段时间；

向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要产生气泡，它们会影响OD值的读数)；

将培养板置于培养箱内孵育1-4小时；

用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

- 细胞增殖-毒性检测

在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)，将培养板放在培养箱中预培养24小时；

向培养板加入不同浓度的待测药物；

将培养板在培养箱孵育一段适当的时间；

向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要产生气泡)；

将培养板置于培养箱内孵育1-4小时；

用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

- 活力计算

细胞存活率*（%）=[(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100%

抑制率*（%）=[(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100%

As:实验孔吸光度(含细胞、培养基、CCK-8溶液和药物溶液)；

Ac: 对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8溶液，不含药物) ；

Ab: 空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8溶液，不含细胞、药物) 。