RIPA即Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液。新赛美生物的RIPA裂解液裂解所得的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP等。主要成分是：50mMTris(pH 7.6)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodiumdeoxycholate，0.1% SDS等多种裂解剂和抑制剂，能有效地抑制蛋白降解。

操作步骤

- 对于培养细胞样品

取适当量的NCM RIPA Buffer裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的浓度为1mM。

注意：NCM RIPA Buffer 不含蛋白酶等抑制剂，根据需要在使用前添加蛋白酶，磷酸酶等抑制剂。

a.对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。 b. 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。 如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

- 对于组织样品

把组织剪切成细小的碎片。

融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的浓度为1mM。

按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加 更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)

用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。